腎上腺素酶聯(lián)診斷試劑盒使用雙抗體夾心法測定標本中人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)水平。用純化的人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次參加甲氧基去甲腎上腺素(MNA),再與HRP標記的甲氧基去甲腎上腺素(MNA)抗體結合,構成抗體-抗原-酶標抗體復合物,通過洗刷后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的甲氧基去甲腎上腺素(MNA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)含量。
腎上腺素樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝結10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如呈現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有沉淀構成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管搜集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有沉淀構成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過重復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉淀構成,應再次離心。
5.組織標本:切開標本后,稱取重量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷凍保存?zhèn)溆?。標本消融后依然保?-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立刻進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免重復凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3辣根過氧化物酶的(HRP)活性。